第一部份：
    本研究主要是發展出一種新的離子層析方法，針對無機陰離子之混合物 (iodate、bromate、nitrite、bromide和nitrate) 同時進行分析。此方法以離子對層析法（Ion-pair chromatography, IPC）的分離原理，結合紫外光吸收偵測器（UV/Vis Detector）進行偵測。選用逆相octadecylsilica (ODS)管柱作為分離管柱，以acetonitrile-TBA- CH3COOH作為移動相，針對移動相pH值、最適波長選擇、離子對試劑濃度、移動相中有機溶劑濃度等是影響滯留時間和分離效果的重要因素進行探討，找出並建立最適分析方法為同時檢測無機陰離子混合物提供一套快速、有效的檢測方式。


第二部份：
    本實驗以高效能液相層析儀（HPLC）結合Photodiode Array (PDA) UV/Vis 偵測器，來進行不同產地中草藥紫苑的分析。將紫苑樣品的萃取液，以梯度沖提方式進行分離，比對不同波長（210、230、254、280nm）所偵測到的圖譜，由分析結果，選擇254nm作為最適合用來製作化學指紋圖譜的波長，並標定出相對比例含量較高的吸收波峰作為主要特徵波峰，藉由主要特徵波峰面積的差異性來建立化學指紋圖譜，及比較不同產地對於紫苑成分的影響。最後，再將實驗數據制定成化學指紋圖譜及雷達圖譜，此化學指紋圖譜如同藥材指紋身分證，以作為藥材品種、產地之參考依據。

PartⅠ
     A novel ion chromatographic method has been developed for the simultaneous analysis of the inorganic anions (iodate, bromate, nitrite, bromide and nitrate) in their mixture. The method is based on the ion-pair chromatographic separation followed by the ultraviolet absorption detection. The separation was achieved on the reverse phase octadecylsilica (ODS) column and acetonitrile-TBA-CH3COOH mobile phase containing tetra-n-butylammonium salt (TBA) as an ion-pairing reagent. The pH of the mobile phase, the optimal wavelength, the concentration of the ion-pairing reagent and the concentration of the organic solvent in the mobile phase are the important factors which affect the retention time and efficiency of the separation. Therefore, the optimal analytic method which was found out and established can provide a fast and efficient method for the simultaneous analysis of the inorganic anions.


PartⅡ
     Our aim in this study is that by utilizing the high performance liquid chromatography combined with the photodiode array (PDA) UV/Vis detector for analyzing the Chinese herb “Ziyuan” which were came from different producing areas. The extracts of the Chinese herb Ziyuan were separated by the gradient elution method and then the chromatograms obtained were compared with the different wavelength 210nm, 230nm, 254nm, 280nm. According to the results, the chromatograms of 254nm wavelength was selected and made the optimal chemical fingerprint chromatogram. Besides, there were several characteristic peaks chosen by the different peak area. The characteristic peaks were established the chemical fingerprint atlas and compared the composition of the Chinese herb Ziyuan which were came from different producing areas. Finally, the data obtained from the chromatograms were made the chemical fingerprint and radar atlas of Chinese herb. This radar atlas is like the identification card of the Chinese herb which could provide the information of their sources and producing areas.

目     錄
第一部分   以高效能液相層析儀並於移動相中加入TBA試劑來分析 
           無機陰離子的混合物
第一章、緒論………………………………………………………….1
一、研究目的………………………..……………………………...1
二、液相層析法概述…………………..…………………………...1
三、離子層析法概述……….……………………………………....5
四、研究動機………………………………………………………..28
第二章、實驗部……………………………………………………..31
一、試劑與樣品………………………………………..…………..31
二、儀器………………………..…………………………………..32
三、測定方法…………………..…………………………………..33
     1.移動相配製………………………………………………...33
     2.樣品的分析………………………………………………...34
四、最適波長的選擇……………………………………………....36
五、探討TBA濃度對分離無機陰離子的影響………………….....37
六、探討CH3CN濃度對分離無機陰離子的影響……………….....37
七、檢量線以及偵測極限的建立…………………………………..37
第三章、結果與討論…………………………………………………38
一、移動相pH值的設定……………………..……………………..38
二、最適波長的選擇………………………………..……………..39
三、探討TBA濃度對分離無機陰離子的影響…………..………...39
四、探討CH3CN濃度對分離無機陰離子的影響……………..…...41
五、檢量線以及偵測極限的建立…………………..……………..43
第四章、結論………………………………………………………..44
第五章、參考資料……………………………………………………65



第二部分   利用高效能液相層析法建立中草藥紫苑的化學指紋圖譜
第六章、緒論…………………………………………………………68
一、中草藥發展概述………………………………………………..68
二、中草藥紫苑的介紹……………………………………………..71
三、常用的中草藥分析方法………………………………………..76
四、中藥指紋圖譜的建構及重要性………………………………..81
五、高效能液相層析法概述………………………………………..86
六、研究目的……………………………………………………….100
第七章、實驗部份……………………………………………...…101
一、藥品與藥材…………………………………………………….101
二、儀器…………………………………………………………….104
三、樣品萃取方法………………………………………………….105
四、高效能液相層析儀操作條件………………………………...106
五、藥材測定方法………………………………………………….107
六、系統再現性…………………………………………………...108
七、化學指紋圖譜的建立………………………………………...108
八、雷達圖的建立………………………………………………...108
第八章、結果與討論……………………………………………….109
一、藥材的處理及保存…………………………………………….109
二、藥材成份的萃取……………………………………………….109
三、建立HPLC分析中藥材的分析條件………….……………....110
     1.前置管柱的選擇…………………...…..……………...110
     2.選擇逆相層析管柱之原因………………...……….……110
     3.添加微量磷酸之目的………………………..……….….110
     4.選擇單一梯度沖堤方法……………………..……………111
四、選擇最適偵測波長作為藥材化學指紋圖譜建立的依據…...111
五、系統再現性探討……………………………………………...112
六、不同產地對於藥材成份之影響……………………………...112
七、化學指紋雷達圖譜的製作…………………………………...113
八、不同產地之藥材樣品相似率及特徵指峰相似率…………...114
第九章、結論……………………………………………………….116
第十章、參考資料………………………………………………….133


                     表  目  錄
第一部分   以高效能液相層析儀並於移動相中加入TBA試劑來分析
           無機陰離子的混合物
表一、按移動相種類分類的層析法………………………………….3
表二、常用的離子交換基質…………………………………………12
表三、HPLC中常見偵測器的基本性質……………………………..14
表四、離子層析法的分離類型………………………………………16
表五、離子交換劑按酸鹼性強弱的分類……………………………17
表六、逆相離子對層析之系統………………………………………21
表七、離子層析法分析對象和物質…………………………………27
表八、離子層析法的主要應用領域…………………………………28
表九、無機陰離子在離子對層析系統中的最佳分離條件…………42
表十、利用不同濃度範圍的陰離子混合物建立檢量線……………43
表十一、無機陰離子之檢量線方程式、線性係數和偵測極限……43



第二部分   利用高效能液相層析法建立中草藥紫苑的化學指紋圖譜
表一、各種型態層析管柱及其官能基………………………………91
表二、正相層析與逆相層析之特性比較………………………….100
表三、不同產地出產的紫苑藥材………………………………….102
表四、紫苑(911057)藥材進樣六次之絕對滯留時間(分鐘)
      之比較...........................................124
表五、紫苑(911057)藥材進樣六次之絕對波峰面積
      之比較……….....................................125
表六、紫苑(911057)藥材進樣六次之相對滯留時間之比較…...126
表七、紫苑(911057)藥材進樣六次之相對波峰面積之比較…….127
表八、6批不同產地紫苑藥材各HPLC波峰之絕對滯留時間(分鐘)
      比較………..………………………..…………………….128
表九、6批不同產地紫苑藥材各HPLC波峰之絕對波峰面積比較..129
表十、6批不同產地紫苑藥材各HPLC波峰之相對滯留時間比較..130
表十一、6批不同產地紫苑藥材各HPLC波峰之相對波峰面積
        比較……………………………………………………….131
表十二、紫苑藥材樣品重疊率及特徵指峰相似率……………….132


                      圖  目  錄
第一部分   以高效能液相層析儀並於移動相中加入TBA試劑來分析
           無機陰離子的混合物
圖一、非抑制型（A）和抑制型（B）離子層析儀的構造示意圖….7
圖二、注射系統中六向閥示意圖………………………………....11
圖三、聚苯乙烯（PS-DVB）的骨架結構示意圖……………………18
圖四、液相層析儀裝置………………………………………………33
圖五、0.2μm的membrane filter……………………………………34
圖六、過濾裝置圖…………………………………………………..35
圖七、離子層析分離系統…………………………………………..36
圖八、無機陰離子（IO3-、BrO3-、NO2-、Br-、NO3-）樣品與
      移動相的UV吸收光譜圖……………………………...…….45
圖九、6％acetonitrile-TBA-CH3COOH移動相中的 TBA濃度效應.46
圖十、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-0.2mM TBA-CH3COOH
      移動相之層析圖……………………………………………..47
圖十一、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-0.5mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………48
圖十二、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-1mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………49
圖十三、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-2mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………50
圖十四、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-4mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………51
圖十五、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-5mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………52
圖十六、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………53
圖十七、無機陰離子混合物於6％acetonitrile-9mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………54
圖十八、acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH移動相中的CH3CN 
        濃度效應………………………………………………....55
圖十九、無機陰離子混合物於4％acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………56
圖二十、無機陰離子混合物於8％acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
        移動相之層析圖……………………………………………57
圖二十一、無機陰離子混合物於10％acetonitrile-6mM TBA-  
          CH3COOH移動相之層析圖………………………….…..58
圖二十二、SampleⅢ混合物於acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
          (6：93.5：0.5,v/v)移動相之層析圖…………………59
圖二十三、SampleⅠ混合物於acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
          (6：93.5：0.5,v/v)移動相之層析圖…………………60
圖二十四、SampleⅡ混合物於acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
          (6：93.5：0.5,v/v)移動相之層析圖…………………61
圖二十五、SampleⅣ混合物於acetonitrile-6mM TBA-CH3COOH
          (6：93.5：0.5,v/v)移動相之層析圖…………………62
圖二十六、無機陰離子樣品之檢量線（A）Iodate、
          (B）Bromide...................................63
圖二十七、無機陰離子樣品之檢量線（C）Bromate、
         （D）Nitrite、（E）Nitrate………………………….64



第二部分   利用高效能液相層析法建立中草藥紫苑的化學指紋圖譜
圖一、紫苑……………………………………………………………72
圖二、紫苑酮（Shionon）之化學結構式………………………….73
圖三、高效能液相層析裝置系統………………………………....88
圖四、光電二極管矩陣偵測器光學途徑……………………………94
圖五、PDA偵測器所得到之三度空間資料………………………….95
圖六、（a）在指定波長後所得的二度空間圖即為層析圖譜
      （b）當指定時間後所得的二度空間圖即為光譜圖……….95
圖七、液相層析法的應用……………………………………………97
圖八、BPC的鍵結方式（a）monomeric bonded phase、
     （b）polymeric bonded phase…………..……..........98
圖九、ODS（C18）的表面結構………………………………………99
圖十、不同產地出產的紫苑藥材………………………………….103
圖十一、移動相梯度沖堤的組成變化…….………………………107
圖十二、紫苑(911057)的UV/Vis全波長吸收光譜圖…………….117
圖十三、紫苑(911057)經HPLC結合PDA偵測器所得之3D圖譜…..118
圖十四、紫苑(911057)四個不同偵測波長層析圖…..…....….119
圖十五、紫苑(911057)最適分析條件層析圖(2D)……………….120
圖十六、紫苑(911057)藥材HPLC/UV層析圖之再現性……………121
圖十七、不同產地之紫苑藥材在254nm波長的HPLC/UV圖譜之
        比較…………..………………………………………….122
圖十八、紫苑藥材HPLC/UV層析圖化學指紋雷達圖圖譜………..123

第一部分   以高效能液相層析儀並於移動相中加入TBA試劑來分析
           無機陰離子的混合物
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