淡江大學覺生紀念圖書館 (TKU Library)
進階搜尋


下載電子全文限經由淡江IP使用) 
系統識別號 U0002-1908201310340700
中文論文名稱 啤酒酵母醛類去氫酶2和3,紫外光及過氧化物的影響
英文論文名稱 The effects of ultraviolet and peroxide on aldehyde dehydrogenase 2 and 3 from Saccharomyces cerevisiae
校院名稱 淡江大學
系所名稱(中) 化學學系碩士班
系所名稱(英) Department of Chemistry
學年度 101
學期 2
出版年 102
研究生中文姓名 曾昱縉
研究生英文姓名 Yu-Jin Zeng
學號 600160161
學位類別 碩士
語文別 中文
口試日期 2013-07-18
論文頁數 71頁
口試委員 指導教授-簡素芳
指導教授-陳銘凱
委員-簡素芳
委員-陳銘凱
委員-官宜靜
中文關鍵字 醛類去氫酶 2  醛類去氫酶 3  啤酒酵母菌 
英文關鍵字 aldehyde dehydrogenase 2  aldehyde dehydrogenase 3  Saccharomyces cerevisiae 
學科別分類 學科別自然科學化學
中文摘要 啤酒去氫酶 ALD2p 和 ALD3p 為 ACDH (acetaldehyde dehyrogenase) 家族中的成員,並利用 NAD+ 作為輔酶。文獻指出,在泛酸合成的途徑中, ALD2p 和 ALD3p 會將中間產物 3-aminopropanal 轉變成為 β-alanine。

在哺乳類中, ALDHs 存在於角膜蛋白質中,以保護眼睛,透過直接吸收紫外光、代謝脂質過氧化物、抗氧化的功能保護眼睛。

由於先前實驗測試不到 ALD2p 及 ALD3p 的活性,所以在此測試是否有其他的功能,例如上述的抗紫外光、代謝脂質過氧化物、抗氧化的功能。

透過剔除 ALD2、ALD3 基因及過度表現 ALD2、ALD3 基因,接著再用滅菌過的超純水清洗,稀釋成不同濃度將菌液沾點於固態培養基上,照射紫外光或稀釋成不同濃度沾點於含有 H2O2 的固態培養基上。
英文摘要 In Saccharomyces cerevisia ALD2 (YMR170c) and ALD3 (YMR169c) are the members of ACDH (acetaldydehyde dehydrogenase) family, and the gene products are supposed to use NAD+ as coenzyme. Recent reference also shows that ALD2 and ALD3 genes are require for pantothenic acid biosynthesis by conversion of 3-aminopropanal to β-alanine.

In mammals, ALDHs have been identified as corneal crystallins and to contribute to eye protection by directly absorbing ultraviolet, or detoxifying reactive aldehydes produced by lipid peroxidation to non-toxic metabolities and act as antioxidant.

In this study, we examined the effects of ultraviolet and peroxide by deletion and overexpression of ALD2 and ALD3 gene.
論文目次 目錄
謝誌 I
中文摘要 II
英文摘要 IV
目錄 V
表目錄 VII
圖目錄 VIII
第一章 序論 1
第二章 實驗方法 5
2.1 儀器與設備 5
2.2 藥品 7
2.3 實驗步驟 13
2.3.1誘導基因表現 13
2.3.2 超音波破碎細胞 14
2.3.3 SDS-PAGE 膠體電泳蛋白質分析法 14
2.3.4 膠體配製 15
2.3.5 蛋白質電泳操作 15
2.3.6 沾點顯現法 (點盤) 17
2.3.6.1 紫外光對剔除 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 17
2.3.6.2 紫外光對過度表現 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 18
2.3.6.3 過氧化物對剔除 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 20
2.3.6.4 過氧化物對過度表現 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 21
2.3.6.5 過氧化物對剔除 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 23
2.3.6.6 過氧化物對過度表現 ALD2 及 ALD3 基因的酵母菌的影響 24
2.3.6.7 丙烯醛對剔除 ALD2 基因的酵母菌的影響 26
2.3.6.8 丙烯醛對過度表現 ALD2 基因的酵母菌的影響 27
2.3.6.9 乙醇對剔除 ALD3 基因的酵母菌的影響 29
第三章 結果與討論 30
第四章 結論 68
參考文獻 69
表目錄
表2.2.1 : YPD medium 組成 9
表2.2.2 : YPD plate 組成 9
表2.2.3 : YPD plate (各別含1 mM、 3 mM、 5 mM H2O2) 組成 9
表2.2.4 : SC-Ura (1% glucose) medium組成 10
表2.2.5 : SC-Ura (1%glucose) plate 組成 10
表2.2.6 : SC-Ura (1%raffinose) medium組成 10
表2.2.7 : Separating gel 組成 11
表2.2.8 : Stacking gel 組成 11
表2.2.9 : Breaking buffer 組成 11
表2.2.10 : 2X staining buffer 組成 11
表2.2.11 : 1X Tris-glycine 電泳緩衝液組成 12
表2.2.12 : Coomassie Brilliant Blue R-250 組成 12
表2.2.13 : Destaining solution 組成 12
圖目錄
Fig. 1 PDH bypass 代謝途徑 1
Fig. 1.2 ALDHs 之功能 2
Fig. 1.3 合成泛酸的途徑及其過程中各基因的功能 3
Fig. 1.4 ALDH3A1 與 ALDH1A1 在角膜中的功能 4
Fig. 3.1 紫外光對剔除基因的影響,能量 3 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 37
Fig. 3.2 紫外光對剔除基因的影響,能量 4 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 38
Fig. 3.3 紫外光對剔除基因的影響,能量 5 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 39
Fig. 3.4 紫外光對過度表現基因的影響,能量 3 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 40
Fig. 3.5 紫外光對過度表現基因的影響,能量 4 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 41
Fig. 3.6 紫外光對過度表現基因的影響,能量 5 × 103 μJ/cm2 (YPD 培養液清洗) 42
Fig. 3.7 紫外光對剔除基因的影響,能量 3 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 43
Fig. 3.8 紫外光對剔除基因的影響,能量 4 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 44
Fig. 3.9 紫外光對剔除基因的影響,能量 5 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 45
Fig. 3.10 紫外光對過度表現基因的影響,能量 3 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 46
Fig. 3.11 紫外光對剔除基因的影響,能量 4 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 47
Fig. 3.12 紫外光對剔除基因的影響,能量 5 × 103 μJ/cm2 (滅菌過的超純水清洗) 48
Fig. 3.13 1 mM H2O2 對剔除基因的影響 49
Fig. 3.14 3 mM H2O2 對剔除基因的影響 50
Fig. 3.15 5 mM H2O2 對剔除基因的影響 51
Fig. 3.16 1 mM H2O2 對過度表現基因的影響 52
Fig. 3.17 3 mM H2O2 對過度表現基因的影響 53
Fig. 3.18 5 mM H2O2 對過度表現基因的影響 54
Fig. 3.19 1 mM H2O2 對剔除基因的影響 55
Fig. 3.20 3 mM H2O2 對剔除基因的影響 56
Fig. 3.21 5 mM H2O2 對剔除基因的影響 57
Fig. 3.22 1 mM H2O2 對過度表現基因的影響 58
Fig. 3.23 3 mM H2O2 對過度表現基因的影響 59
Fig. 3.24 5 mM H2O2 對過度表現基因的影響 60
Fig. 3.25 1 mM acrolein 對剔除及過度表現基因的影響 61
Fig. 3.26 3 mM acrolein 對剔除及過度表現基因的影響 62
Fig. 3.27 5 mM acrolein 對剔除及過度表現基因的影響 63
Fig. 3.28 6% ethanol 對剔除基因的影響 64
Fig. 3.29 8% ethanol對剔除基因的影響 65
Fig. 3.30 10% ethanol 對剔除基因的影響 66
Fig. 3.31 ALD2-pYes2 和 ALD3-pYes2 誘導及未誘導比較 67
參考文獻 1. Goffeau, A., Barrell, B. G., Bussey, H., Davis, R. W., Dujon, B., Feldmann, H., Galibert, F., Hoheisel, J. D., Jacq, C., Johnton, M., Louis, E. J., Mewes, H. W., Murakami, Y., Philippsen, P., Tettelin, H., Oliver, S. G. (1996). Life with 6000 genes. Science 274, 563-567.
2. Karathia, H., Vilaprinyo, E., Sorribas, A., Alves, R. (2011). Saccharomyces cerevisiae as a Model Organism: A Comparative Study. Plos One 6, e16015.
3. Gancedo, C. and Serrano, R. (1989). Energy-yielding metabolism. Yeast 3, 205-259.
4. Lindahl, R. (1992). Aldehyde dehydrogenases and their role in carcinogenesis. Critical Reviews in Biochemistry and Molecular 27, 283-335.
5. emize, F., Andrieu, E. and Dequin, S. (2000). Engineering of the Pyruvate Dehydrogenase Bypass in Saccharomyces cerevisiae: Role if the Cytosolic Mg2+ and Mitochondrial K+ Acetaldehyde Dehydrogenases Ald6p and Ald4p in Acetate Formation during Alcoholic Fermentation. Applied and Environmental Microbiology 66, 3151-3159.
6. Jacaobson, M. K. and Bernofsky, C. (1974). Mitochondrial acetaldehyde dehydrogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochemica et Biophysica Acta 350, 277-291.
7. Bostian, K. A. and Betts, G. F. (1978). Purification and Properties of Potassium-Activated Aldehyde Dehydrogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochemical Journal 173, 773-768.
8. Bostian, K. A. and Betts, G. F. (1978). Kinetics and Reaction Mechanism of Potassium-Activated Aldehyde Dehydrogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochemical Journal 173, 787-798.
9. Seegmiller, J. E. (1953). Triphospyrideine Nucleotide-Linked Aldehyde Dehydrogenase from yeast. The Journal of Biological Chemistry 201, 629-637.
10. Seegmiller, J. E. (1955). TPN-linked aldehyde dehydrogenase from yeasgt: CH3CHO + TPN+ +H2O → CH3COOH + TPNH + H+. Methods in Enzymology 1, 511-514.
11. White, W. H., Skatrud, P. L., Xue, Z., Toyn, J. H. (2003). Specialization of Function Among Aldehyde Dehydrogenases: The ALD2 and ALD3 Genes Are Required for β-Alanine Biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae. Genetics 163, 69-77.
12. Dickinson, F. M. (1996). The purification and some properties of the Mg2+-activated cytosolic aldehyde dehydrogenase of Saccharomyces cerevisiae. Biochemical Journal 315, 393-399.
13. Navarro-Avino, J. P., Prasad, R., Miralles, V. J., Benito, R. M. Serrano, R. (1999). Aproposal for nomenclature of aldehyde dehydrogenases in Saccharomyces cerevisiae and characterization of the stress-inducible ALD2 and ALD3 genes. Yeast 15, 829-842.
14. Jacobson, M. K. and Bermofsky, C. (1974). Mitochondrial acetaldehyde dehyderogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochimica et Biophysica Acta 350, 277-291.
15. Tessier, W. D., Meaden, P. G., Dickinson, F. M. Midgley, M. (1998). Identification and disruption of the gene ecoding the K(+)-activated acetaldehyde dehydrogenase of Saccharomyces cerevisiae. FFMS Microbiology Letters 164, 29-34.
16. Kunrita, O. and Nishida Y. (1999). Involvement of mitochondrial aldehyde dehydrogenase ALD5 in maintenance of the mitochondrial electron transport chain in Saccharomyces cerevisiae. FEMS Microbiology Letters 181, 281-287.
17. Meaden, P. G., Dickinson, F. M., Mifsud, A., Tessier, W., Westwater, J., Busseu, H. Midgley, M. (1997). The ALD6 Gene of Saccharomyces cerevisiae Encodes a Cytosolic, Mg2+-Activated Acetaldehyde Dehydrogenase. Yeast 13, 1319-1327.
18. Dean, R.T., Fu, S., Stocker, R., Davies, M. J. (1997). Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation, Biochemical Journal 324, 1-18.
19. Stagos, D., Chen, Y., Cantore, M., Jester, J. V., Vasiliou, V. (2010). Corneal aldehyde dehydrogenases: Multiple functions and novel nuclear localization. Brain Research Bulletin 81, 211-218.
20. Trotter, E. W., Collinson, E. J., Dawes, I. W., Grant, C. M. (2006). Old Yellow Enzymes Protect against Acrolein Toxicity in the Yeast Saccharomyces cerevisiae. Applied and Environmental Microbiology 72, 4885-4892.
21. Yang, J., Bae, J. Y., Lee, Y. M., Kwon, H., Moon, H. Y., Kang, H. A., Yee, S., Kim, W., Choi, W. (2011). Construction of Saccharomyces cerevisiae Strains With Enhanced Ethanol Tolerance by Mutagenesis of the TATA-Binding Protein Gene and Identification of Novel Genes Associated With Ethanol Tolerance. Biotechnology and Bioengineering 108, 1776-1787.
論文使用權限
  • 同意紙本無償授權給館內讀者為學術之目的重製使用,於2016-08-20公開。
  • 同意授權瀏覽/列印電子全文服務,於2016-08-20起公開。


  • 若您有任何疑問,請與我們聯絡!
    圖書館: 請來電 (02)2621-5656 轉 2281 或 來信