系統識別號 | U0002-0203202119313200 |
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DOI | 10.6846/TKU.2021.00046 |
論文名稱(中文) | 探討香豆素衍生物對於血管生成與抗血栓形成之能力 |
論文名稱(英文) | Angiogenic and anti-thrombotic activities assessments of coumarin derivatives |
第三語言論文名稱 | |
校院名稱 | 淡江大學 |
系所名稱(中文) | 化學學系碩士班 |
系所名稱(英文) | Department of Chemistry |
外國學位學校名稱 | |
外國學位學院名稱 | |
外國學位研究所名稱 | |
學年度 | 109 |
學期 | 1 |
出版年 | 110 |
研究生(中文) | 孫柏傑 |
研究生(英文) | Bo-Jie Sun |
學號 | 608160114 |
學位類別 | 碩士 |
語言別 | 繁體中文 |
第二語言別 | |
口試日期 | 2021-01-08 |
論文頁數 | 49頁 |
口試委員 |
指導教授
-
陳曜鴻
委員 - 陳銘凱 委員 - 蔡振寧 |
關鍵字(中) |
血管生成 抗血栓形成 香豆素 斑馬魚 雞胚絨毛膜測試 |
關鍵字(英) |
Angiogenesis Anti-thrombosis Coumarin zebrafish CAM assay |
第三語言關鍵字 | |
學科別分類 | |
中文摘要 |
香豆素的衍生物具有治療深靜脈血栓、冠狀動脈粥樣硬化、心律不整等心血管疾病的潛力。本篇論文的主要目的是研究新型香豆素衍生物mix-1~mix-6之影響血管生成和抗凝血的能力分析。首先利用鹼性磷酸酶染色以及螢光觀察對於斑馬魚胚胎的腸下靜脈(SIV)以及雞胚絨毛膜測試(CAM assay)觀察藥物對血管生成的影響。在斑馬魚模型我們浸泡mix-1 ~ mix-6後,發現mix-2、mix-4和控制組對照下,有促進血管增生的現象(branch points 約為控制組的2倍);而在CAM assay也觀察到促進血管增生的現象(branch points 約為控制組的3倍)。有鑒於在兩個動物模型皆觀察到促進血管增生,所以進一步用於治療血管內皮細胞受損所造成的血栓。利用苯肼(Phenylhydrazine)對斑馬魚胚胎造成急性溶血性貧血,使得血管受損出血並模擬血管內皮細胞受損後在血管內形成血栓的情形,而在斑馬魚胚胎尾巴靜脈造成的血栓最為嚴重。在mix-2和mix-4治療下,利用紅血球染色觀察斑馬魚胚胎尾巴靜脈血管的血栓數量,mix-2、mix-4血栓減少約2 ~ 3倍。由實驗結果得知,mix-2和mix-4確實有促進血管增生和抗血栓形成的能力。本論文探討到以香豆素為主體的衍生物對血管生成的影響以及抗血栓的程度,並提供一個利用促進血管增生的角度來篩選抗凝血的藥物,最終篩出mix-2和mix-4作為具潛力之抗凝血藥物。 |
英文摘要 |
Coumarin derivatives are currently used in clinical treatment that have great potential of deep vein thrombosis, coronary atherosclerosis, arrhythmia and other cardiovascular diseases. The main purpose of this thesis is to study the ability of angiogenesis and anti-thrombotic activity new coumarin derivatives, mix-1~mix-6. First of all, we used alkaline phosphatase staining experiment to make zebrafish embryos’ SIV(subintestinal vessel) visible. After mix-1~mix-6 treatment, we found that mix-2 and mix-4 treated embryos displayed more branch points (around 2-fold, compared to the control group). Then, chick chorioallantoic membrane (CAM) assay were carried out and similar results were observed as well(compared to the control group, branch points in the mix2/4-treated group were about 3-folds). Taken together, we suggested that mix-2 and mix-4 possessed pro-angiogenic activities. In addition, the anti-thrombotic activities of mix-2 and mix-4 were further investigate. We used phenylhydrazine(PHZ) to damage the blood vessel and result in bleeding on zebrafish embryos, it looks like the vascular endothelial cell got damage after thrombosis in zebrafish. After PHZ treatment, embryos were further treated with mix-2 and mix-4, and O-dianisidine staining was performed. Results showed that the numbers of thrombus in the zebrafish tail vein regions were largely decreased(efficacy of mix-2 treatment is 52.48 %, and mix-4 treatment is 47.57 %). On the basis of these observations, we proposed that mix-2 and mix-4 were able to promote angiogenesis and prevent thrombosis. |
第三語言摘要 | |
論文目次 |
謝誌―――――――――――――――――――――Ⅰ 中文摘要 ――――――――――――――――――――Ⅱ 英文摘要 ――――――――――――――――――――Ⅲ 目錄 ――――――――――――――――――――――Ⅳ 圖索引 ―――――――――――――――――――――Ⅶ 表索引 ―――――――――――――――――――― Ⅷ 第一章 前言 ――――――――――――――――――― 1 第一節 香豆素(Coumarin)概述 ――――――――――――――― 1 1.1 香豆素的來源 ――――――――――――――――――――――――― 1 1.2 香豆素衍生物的出現 ―――――――――――――――――――――― 2 1.3 香豆素衍生物應用於研究 ―――――――――――――――――――― 3 第二節 血管生成與抗血栓形成 ―――――――――――――― 5 2.1 血管生成的原理 ―――――――――――――――――――――――― 5 2.2 抗血栓形成之成因 ――――――――――――――――――――――― 6 2.3 血管生成與抗血栓形成對人體之重要性 ―――――――――――――― 7 第三節 合成香豆素衍生物 ―――――――――――――――― 9 第四節 模式物種-斑馬魚 ―――――――――――――――― 11 第五節 研究動機 ―――――――――――――――――――― 12 第二章 材料與方法 ――――――――――――――― 13 第一節 斑馬魚飼養方式及胚胎收集 ―――――――――――― 13 第二節 藥物浸泡 ―――――――――――――――――――― 13 2.1 香豆素衍生物mix-1 ~ mix-6浸泡 ―――――――――――――――― 13 2.2 二甲基亞碸(DMSO)浸泡 ―――――――――――――――――――― 14 2.3 阿斯匹靈(Aspirin)與苯肼(PHZ, Phenylhydrazine)共同浸泡 ―――――― 15 2.4 mix-1 ~ mix-6與苯肼(PHZ)共同浸泡 ―――――――――――――― 15 2.5 苯肼(PHZ)單獨浸泡 ―――――――――――――――――――――― 16 第三節 內源性鹼性磷酸酶染色 ―――――――――――――― 16 3.1 實驗方法 ―――――――――――――――――――――――――― 16 3.2 影像分析 ―――――――――――――――――――――――――― 17 第四節 紅血球染色(O-dianisidine staining) ―――――――――― 18 4.1 實驗方法 ―――――――――――――――――――――――――― 18 4.2 影像分析 ―――――――――――――――――――――――――― 19 第五節 雞絨毛膜測試(CAM assay) ――――――――――――― 20 5.1 實驗方法 ―――――――――――――――――――――――――― 20 5.2 影像分析 ―――――――――――――――――――――――――― 20 第六節 軟體與設備 ――――――――――――――――――― 22 6.1 顯微鏡 ――――――――――――――――――――――――――― 22 6.2 拍攝系統及軟體 ――――――――――――――――――――――― 22 6.3 影像處理軟體 ―――――――――――――――――――――――― 22 第七節 藥品 ―――――――――――――――――――――― 22 第八節 冷凍切片前置處理和方法 ――――――――――――― 23 第九節 蘇木素與伊紅染色法(H&E stain) ―――――――――― 24 第三章 研究結果 ―――――――――――――――― 25 第一節 mix-1 ~ mix-6浸泡條件與存活率 ―――――――――― 25 第二節 mix-1、 mix-2、 mix-4 對斑馬魚胚胎血管生成的影響― 26 第三節 mix-2、mix-4對於不同物種的血管生成影響 ――――― 30 第四節 mix-2、mix-4 對於急性溶血的治療及抗凝血效果 ――― 33 第四章 討論 ―――――――――――――――――― 41 第一節 mix-2和mix-4對血管生成影響 ――――――――――― 41 第二節 mix-2和mix-4預防因外在環境誘發溶血性貧血產生之血栓 ―――――――――――――――――――――――――――― 42 第三節 mix-2和mix-4促進血管增生和預防血栓形成的關聯性 ― 42 第四節 抗血小板藥物與抗凝血藥物―――――――――――― 44 第五節 mix系列香豆素衍生物未來研究方向―――――――――45 參考文獻 ―――――――――――――――――――― 47 圖索引 圖一. 從光滑黃皮的莖分離出香豆素衍生物 ――――― 4 圖二(Ⅰ). 香豆素衍生物mix-1 ~ mix-6之結構 ―――― 10 圖二(Ⅱ). 香豆素衍生物mix-1 ~ mix-6之官能基 ――― 11 圖三. 藥物浸泡測試斑馬魚胚胎SIV的影響 ――――― 17 圖四. Branch points在斑馬魚胚胎SIV判斷 ――――― 18 圖五. 斑馬魚胚胎尾巴靜脈(CV)示意圖 ――――――― 19 圖六. 雞絨毛膜測試示意圖 ―――――――――――― 21 圖七. 浸泡mix-1 ~ mix-6存活率 ――――――――― 26 圖八. mix-1、mix-2和mix-4對於AB strain(Wild-type)血管生成的影響 ――――――――――――――――――― 28 圖九. mix-2和mix-4對於Tg(fli1:EGFP)血管生成的影響 ―――――――――――――――――――――――― 30 圖十(Ⅰ). mix-2和mix-4 在雞胚絨毛膜測試中血管增生的影響 ――――――――――――――――――――――― 32 圖十(Ⅱ). mix-2和mix-4 在雞胚絨毛膜測試中血管增生分 析比較 ――――――――――――――――――――― 33 圖十一. 斑馬魚胚胎尾巴靜脈經PHZ誘發急性溶血性貧血造成血栓示意圖 ――――――――――――――――― 34 圖十二(Ⅰ). PHZ誘導斑馬魚胚胎產生溶血性貧血,以mix-2和mix-4 治療或預防血栓的形成 ―――――――――― 35 圖十二(Ⅱ). 治療或預防血栓形成之效果 ―――――― 37 圖十三(Ⅰ). 斑馬魚胚胎紅血球染色冷凍切片示意圖 ―― 38 圖十三(Ⅱ). 斑馬魚胚胎紅血球染色切片圖 ――――― 39 表索引 Table 1. mix-1 ~ mix-6的化學式及其分子量 ――――― 23 |
參考文獻 |
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